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蛋白质质谱分析服务

多肽测序原理及多肽分析技术

多肽测序是研究生物体的内源性多肽和小分子蛋白,包括但不限于宫颈粘液、血液,脑脊液,乳汁等体液中以及在动植物组织样本中多肽氨基酸的定性定量研究。内源性多肽包含有许多信号调节分子,如细胞因子,生长激素,激素肽等等,还有不少功能未知的小分子蛋白和肽段,有的属于循环体液中某些蛋白的疾病特异的降解片段,这些可溶的片段可以提供有关机体疾病状态、药效毒性等相关丰富信息。

多肽测序技术服务即是通过不同状态的蛋白多肽样本,实施不同的蛋白多肽提取步骤,通过高分辨质谱以及对质谱数据的序列分析,在动植物、微生物以及纯化后的多肽提取物中鉴定尽可能多的多肽序列,通过质谱数据定性定量分析进而筛选到潜在的多肽标志物。

多肽测序应用案例 一

研究目的:鉴定人乳汁中的多肽及其功能
多肽样本:5个妈妈哺乳期第28天乳汁

牛奶多肽测序步骤

多肽样本制备
第一步,乳汁样品:去除脂类和蛋白,纯化出样品的多肽;
多肽测序
第二步,LC-MS/MS 质谱分析:Exclustion list 增加鉴定数;
多肽测序数据质谱分析
第三步,数据分析:多肽鉴定及内源性断裂位置分析;
多肽功能性分析
第四步,功能性实验:乳汁纯化多肽的抗菌性实验。

实验结果:
    鉴定到乳汁样品中属于37个蛋白的300多个肽段,其中最多的肽段属于β-酪蛋白,但是其他乳汁高风度蛋白如乳铁蛋白,乳白蛋白,免疫球蛋白A没有肽段被鉴定到。对比鉴定到的多肽到其对应蛋白序列,发现内源性多肽只来源于一些特定的蛋白,以及蛋白特异性的序列。许多鉴定到的乳汁肽段与已知的抗菌肽或免疫调节多肽序列相似,文章中乳汁纯化的肽段也被实验证明可以抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长。
    同一研究小组在另一篇关于乳汁中内源性多肽的研究中,报告了乳腺中内源性蛋白酶活性是高度特异和保守的。蛋白内源性降解主要发生在蛋白无序结构区域。

多肽组学

多肽测序质谱数据分析图例

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