肝癌细胞磷酸化蛋白质组学研究进展

细胞骨架重塑这一生物学过程与肝癌侵袭转移能力密切相关；参与细胞骨架重塑的NES蛋白和参与MAPK信号通路和黏合斑信号通路的PRKCA蛋白磷酸化修饰水平的变化是影响低转移潜能MHCC97-L细胞向高转移潜能细胞MHCC97-H变化的重要调控机制。这是日前安徽医科大学研究生院研究人员发表在2014年第11期《安徽医科大学学报》杂志上的最新研究成果。
该论文旨在研究具有不同侵袭转移能力的肝癌细胞系的磷酸化蛋白质组的动态变化。

首先用含有重稳定同位素标记的精氨酸和赖氨酸的培养基对MHCC97-L进行重稳定同位素标记氨基酸的细胞培养（SILAC）；用含有轻稳定同位素标记的精氨酸和赖氨酸的培养基对MHCC97-H进行SILAC标记。将完成标记的两种肝癌细胞系的蛋白质按照1∶1混合，并用trypsin进行溶液消 化；对消化得到的肽段进行除盐，并通过固相金属离子亲和色谱（IMAC）的方法进行磷酸化肽段的富集。磷酸化肽段通过质谱进行检测，并通过 MaxQuant进行鉴定和定量。最后通过Z检验进行统计学分析，并对差异调控的磷酸化肽对应的蛋白质进行基因本体（GO）分析和STRING网络分析。

最终鉴定了918个磷酸化肽段，其中806个磷酸化肽段的磷酸化位点可以定位和定量。通过Z检验，共得到了91个磷酸化修饰水平发生变化的肽段，对应 25个磷酸化蛋白质。通过对这25个蛋白质进行GO分析发现，细胞骨架重塑过程中的蛋白质在MHCC97-L和MHCC97-H中磷酸化修饰形式严重失调。通过STRING分析发现，NES和PRKCA处于网络的重要节点位置。

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